Xây dựng phương pháp phát hiện và định lượng vi khuẩn Bacillus subtilis bằng kỹ thuật realtime PCR

Abstract

Bacillus subtilis là loài vi khuẩn được ứng dụng rộng rãi trong sản xuất probiotic. Các chủng thuộc loài này có khả năng tạo nội bào tử, chịu được điều kiện pH acid của dạ dày và nhiều chủng đã được chứng minh có khả năng sản xuất các enzyme hỗ trợ tiêu hóa thức ăn và ức chế các loại vi khuẩn gây bệnh. Trong nghiên cứu này, phương pháp phát hiện và định lượng Bacillus subtilis đã được xây dựng dựa trên việc nhân gen aprE bằng kỹ thuật realtime PCR. Gen aprE mã hóa tiền chất của độc tố subtilisin và là một gen đặc hiệu, có tính bảo tồn cao của B. subtilis. Phương pháp được đánh giá có độ nhạy cao với giới hạn phát hiện là 102 CFU/mL, giới hạn định lượng là 102 CFU/mL, độ đặc hiệu và độ chính xác đều đạt 100%. Các đường cong chuẩn được xây dựng bằng cách sử dụng chu kỳ ngưỡng (Ct) so với mật độ vi khuẩn B. subtilis thể hiện tương quan tuyến tính (R2 = 1, độ dốc = - 3,584).